科基都有什么颜色？
首先，科基不是一个颜色，是三色异构体（红、绿和蓝）。 这些颜色是怎么来的呢？原来，在合成科基的过程中，最后一步反应是不定量的，因此会存在一些没有反应完的未反应物，而不同染色体的三股螺旋RNA（ssDNA）对于紫外光的吸收是不一样的，所以可以通过测量吸收的光量来计算每种染色体的含量比。
由于6-磷酸葡萄糖通过G3P途径可以再合成dNTP供PCR扩增使用，因此如果加入过量6-磷酸葡萄糖，就可以通过添加的培养基浓度以及最终产物中dNTP的含量计算出每一轮PCR的扩增效率。 不过，在计算每一轮的扩增程度时，需要减去非特异性扩增（通常由引物二聚体引起）的量。为了准确测定这一部分，需要设计一条能区分两条引物的特异性条带（图1）。
在扩增的最后一个循环之前，分别取样，用琼脂糖凝胶电泳检测目的基因是否成功扩增。 每个循环的扩增程度可用下列公式表示 Ct=\frac{E}{\sqrt{A_{0}}} 式中Ct为循环数；E为扩增的DNA总量，用dNTPs的含量来表示；A0为第一轮PCR的模板，即含2.5 nmol dNTP的DNA。 如果每一个循环的扩增能够精确地进行下去，那么通过上述公式计算的Ct值应该是一个常数。但实际上由于引物结合RNA链形成DNA双链的过程并非百分之百有效，而且每次循环末段的退火温度均一性也无法达到理想状况，因此Ct值是一个相对值。随着循环次数增加，误差也会呈指数增长，所以在实际工作中并不会严格遵循上述公式。